2021-09-23 17:07:47
標準品的制備:標準品的制備是一個非常復(fù)雜的問題,也是標記免疫分析中比較難制備的成分。以下博林達討論了實驗室標準品(或商業(yè)試劑中的標準品)的制備。
基質(zhì)制備:如上所述,標準品的介質(zhì)(基質(zhì))組成應(yīng)與供試品相同。對于大多數(shù)用于測定血清中某種物質(zhì)的標準品,采用不含待測物質(zhì)的零血清來制備反應(yīng)介質(zhì)環(huán)境。但有時零值血清的制備是很困難的,所以有些標準品用適當?shù)木彌_液配制,并在緩沖液中加入一定量的載體蛋白(通常為1%~2%牛血清白蛋白)使其成為類似于樣品的介質(zhì)環(huán)境。
零值血清的制備方法有:
吸附法:血清中的小分子物質(zhì),如三碘甲腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)等,可用活性炭吸附去除。這種方法簡單,但被測物質(zhì)去除困難,不能用這種方法制備大分子活性物質(zhì)。
反復(fù)凍融法:大分子活性物質(zhì)可用低值血清,反復(fù)凍融使受試物失活。這樣可以滅活大部分蛋白質(zhì)激素,但也很難獲得真正的零值血清。
親和層析法:用特異性抗體制備親和層析柱吸附待測抗原。該方法可用于獲得高質(zhì)量的零值血清,但該方法較為復(fù)雜且成本較高。
標準物純品的選擇:應(yīng)選擇化學純度高、免疫純度高的純品作為標準品。其中,免疫純度尤為重要,標準品中不應(yīng)含有與被測物質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)的物質(zhì)。
標準品的制備:先用零值血清制備高濃度標準品,然后按照實驗系統(tǒng)的要求,將高值血清用零值血清稀釋至所需濃度,使其達到預(yù)定的濃度,要求并由不同濃度的系列標準品組成。